A aplicação opcional de contagem de plaquetas por fluorescência “PLT-F”
A aplicação PLT-F disponível para os analisadores das séries XR e XN foi concebida como um canal de medição dedicado para fornecer contagens de plaquetas exatas e precisas em análises hematológicas de rotina - mesmo com amostras muito trombocitopénicas ou mais problemáticas com interferências. Uma combinação de reagentes dedicada foi especificamente concebida para cumprir este objetivo.
O marcador de fluorescência etiqueta especificamente as plaquetas e nenhuma das outras células sanguíneas. Isso minimiza as interferências e é a principal razão para a correlação extremamente boa com o método de citometria de fluxo imunológico CD41/CD61*. Outra razão é a elevada precisão de medição na faixa de baixa concentração, uma vez que o canal PLT-F analisa um volume cinco vezes maior da amostra aspirada em comparação com a medição padrão de deteção DC.
A análise PLT-F oferece uma quantificação rápida e totalmente automatizada da fração imatura de plaquetas (IPF e IPF#). Os parâmetros IPF ajudam num diagnóstico diferencial rápido e eficiente da trombocitopenia, pois podem ser utilizados pelos clínicos como uma sugestão inicial sobre se a possível causa está na medula óssea ou no sangue periférico*.
Com amostras severamente trombocitopénicas e com uma mensagem de ação relativa a um resultado de plaquetas não fiável medido por deteção DC, os conjuntos de regras da Série XN e da Série XR acionam automaticamente a medição de PLT-F como um teste reflexo. Isto garante que apenas as amostras que necessitam desse teste reflexo são medidas no canal PLT-F, assegurando um funcionamento eficiente e económico da aplicação PLT-F.
Para doentes com trombocitopenia não clara, o opcional TWO (Thrombopoiesis Workflow Optimisation) do Extended IPU aciona a análise PLT-F para disponibilizar as informações clinicamente relevantes do parâmetro IPF. Essa decisão automática ajuda a padronizar e otimizar todo o fluxo de trabalho de plaquetas, com base num conjunto de regras totalmente personalizável.
Análise de plaquetas com citometria de fluxo e fluorescência
As membranas das plaquetas são perfuradas pelo reagente de lise, mas as células permanecem amplamente intactas durante esse processo. Posteriormente, o marcador de fluorescência marca especificamente o RNA dentro das plaquetas, evitando interferências com outras células ou fragmentos de tamanho semelhante. Isso ocorre devido à marcação de organelas celulares ricas em ácidos nucleicos, tais como mitocôndrias e retículo endoplasmático, em vez de membranas celulares.
Através da luz dispersa para frente (que reflete o tamanho) e o sinal de fluorescência (que reflete o conteúdo de ácido nucleico marcado), as plaquetas são separadas dos eritrócitos e leucócitos, e são exibidas adequadamente no scattergram PLT-F.
A aplicação PLT-F também permite a quantificação rápida e totalmente automatizada da fração imatura de plaquetas (IPF e IPF#). As plaquetas imaturas podem ser separadas das plaquetas maduras, visto que contêm mais RNA do que as maduras, refletido por sinais de fluorescência aumentados. Além disso, como são ligeiramente maiores, o sinal de dispersão para frente delas também é mais forte do que o das plaquetas maduras.
A figura abaixo mostra o scattergram padrão do PLT-F com uma distribuição normal de células.
A Série XR utiliza sinais provenientes da dispersão de luz laser em dois ângulos (FSC e SSC) e sinais de fluorescência (SFL). Cada célula sanguínea detetada possui coordenadas individuais de x, y, z, representando os sinais FSC, SSC e SFL, respetivamente. Utilizando algoritmos avançados, a Série XR é capaz de identificar e agrupar tipos de células, especialmente células anormais, com base no tamanho celular, complexidade interna e conteúdo de DNA/RNA. O resultado dessa análise é refletido nos scattergrams 3D, que podem ser rodados em todas as direções para inspecionar as populações celulares desde diferentes ângulos.
Benefícios para laboratórios e clínicos
- Com anormalidades e contagens baixas, a contagem precisa e exata de plaquetas torna-se um desafio. A aplicação PLT-F da Sysmex e o conceito de gestão de plaquetas garantem que um laboratório possa relatar de forma confiável, enquanto otimiza todo o fluxo de trabalho de plaquetas e reduz o tempo de resposta. Não há mais a necessidade demorada de contar plaquetas manualmente ou por meio de tecnologias e dispositivos separados.
- Para amostras com uma contagem imprecisa causada por anomalias ou uma contagem de plaquetas muito baixa, o analisador da série XR ou da série XN efetua automaticamente uma medição reflexa no canal de medição de plaquetas dedicado PLT-F.
- A análise PLT-F resolve a maioria das interferências presentes com a deteção DC, uma vez que o marcador de fluorescência marca especificamente as plaquetas - portanto, não há interferência, mesmo na presença de eritrócitos fragmentados. As contagens falsamente baixas devido a plaquetas gigantes não ocorrem mais com a análise PLT-F, e os aglomerados de plaquetas são detetados no canal PLT-F e apontados pelo analisador.
- A elevada precisão prevalece também nos limites de transfusão de plaquetas, devido à tecnologia de fluorescência e ao volume de contagem 5 vezes maior - isso auxilia na tomada de decisões clínicas*.
- Os resultados são diretamente comparáveis ao método de citometria de fluxo imunológico de referência CD41/CD61. Em muitos artigos de investigação científica, observou-se que o PLT-F possui uma correlação muito elevada com esse método*.
- A fração imatura de plaquetas (IPF) apoia o diagnóstico diferencial da trombocitopenia*.
- Os volumes de aspiração no modo sangue total são apenas de 88 μL, e o perfil PLT-F pode até ser analisado no modo pré-diluído, o que é particularmente vantajoso ao medir a IPF a partir duma amostra de sangue de um neonato para apoiar o diagnóstico diferencial da trombocitopenia neonatal.
- A contagem de plaquetas imaturas IPF# enumera as plaquetas mais recentemente produzidas na medula óssea*.
- O adicional e opcional TWO incorporado no Extended IPU apoia o monitoramento de doentes trombocitopénicos e otimiza os acionadores do PLT-F para garantir resultados de plaquetas comparáveis ao longo do período de acompanhamento.
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